REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE -PCR



Em 1993, Kary Mullis, um geneticista a serviço da Cetus, uma empresa de Biotecnologia da Califórnia, recebeu o prêmio Nobel da Química pelo desenvolvimento de um método que permite sintetizar, em poucas horas e in vitro, uma grande quantidade de um determinado fragmento de DNA. Esta técnica faz parte integrante da moderna biotecnologia molecular, tendo trazido um enorme progresso a áreas como o diagnóstico de doenças, medicina forense e muitas outras para além da investigação em Biologia.

A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction - Reação em Cadeia pela Polimerase) baseia-se no processo de replicação de DNA que ocorre in vivo . Durante o método da PCR, são usadas elevadas temperaturas de forma a separar as moléculas de DNA em duas cadeias simples, permitindo então a ligação de oligonucleotídeos iniciadores (primers), também em cadeia simples e geralmente constituídos por 15 a 30 nucleotideos, obtidos por síntese química.

Para amplificar uma determinada região de um gene, são necessários dois iniciadores complementares das seqüências que flanqueiam o fragmento de DNA a amplificar, nos seus terminais 3´, de modo a permitir a atuação da enzima DNA polimerase durante a síntese da cadeia complementar, usando como molde cada uma das duas cadeias simples constituintes do DNA a amplificar.

A reação é exponencial, 1 única fita de DNA do microoganismo irá dar origem a milhares no final da reação




Como o processo é realizado em nosso laboratório


A etapa de extração de DNA ou RNA é feita em laboratório separados, exclusivos para essa finalidade
O processo de extração do DNA de amostras sanguíneas é realizado com um kit importado (GFX genomic Blood kit)
O processo de extração do RNA de amostras de urina é realizado com um kit importado (RNA mini spin kit)
Utilizamos pipetas automáticas e pipetas repetidoras durante as etapas de extração
O preparo dos reagentes da reação é realizado em capela de fluxo laminar de uso exclusivo para essa finalidade
Os reagentes utilizados são das melhores marcas do mercado (Go Green master Mix - Promega -USA)
Nossos termocicladores são de última geração
Os produtos amplificados da reação de PCR são aplicados no fluxo laminar na sala de Nested PCR (uso exclusivo)
Os produtos amplificados são visualizados em gel de agarose e fotografados em equipamento especializado finalidade
Toda bateria de exames é feita com um controle negativo e outro positivo previamente caracterizados.
Realizamos periodicamente uma reação de PCR para detectar DNA constitutivo de células de cães e gatos (gene GADPH).


Todos os procedimentos são realizados por médicos veterinários

Esse é o nosso diferencial. Dessa forma, fica mais fácil para os profissionais que estão requisitando os exames, contar com uma equipe que entende claramente das questões clínicas e diagnósticas das enfermidades que estão sob processo de identificação pela ténica da PCR.

Entre em contato com nosso laboratório para todas as informações.